珊瑚来源群体淬灭活性产生菌的筛选与抑菌活性(5) - 运动精品杂志社投稿

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珊瑚来源群体淬灭活性产生菌的筛选与抑菌活性(5)

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摘要：

经16S rDNA测序鉴定，本研究筛选出的群体淬灭活性菌株以弧菌为主，目前关于群体淬灭活性弧菌的研究较少，如田晓荣等[39]采用平板交互划线和高通量筛选的方法，从青岛近海沉积物生物被膜中分离得到83株共54种具有群体感应和群体淬灭活性的细菌，其中优势属为弧菌属和鲁杰氏菌属；于敏等[40]发现，纤维弧菌科海洋细菌中的AHL酰基转移酶与阿古菌素的AHL酰基转移酶具有同源性。由此推测，海洋中可能有更多具有群体淬灭活性的弧菌，仍需科研人员进一步深入挖掘。

群体淬灭活性微生物的应用现今正被一步步开发。抗生素的发现与滥用导致病原菌抗性广泛出现，而群体淬灭能减弱病原菌的致病毒性且不会产生相关抗药性，是近年来替代抗生素的最有希望策略[41]。如Nhan等[42]应用一种N-酰基高丝氨酸内酯降解菌富集培养物(ECs)取代抗生素来控制疾病，从而实现更可持续的水产养殖生产。以微生物繁殖代谢为主要原因的高蛋白食品腐败以及果蔬产品病害对食品流通及销售造成了巨大的障碍，阻碍相关产业的进一步发展，以群体淬灭活性菌作为微生物群体感应抑制剂成为食品工业中新的研究热点[43]。Vinoj等[44]发现地衣芽孢杆菌()DAHB1产生的AHL内酯酶AiiA能够抑制弧菌生物被膜的产生，同时显著降低虾的感染率和死亡率。本实验筛选出的多株群体淬灭活性菌株可为珊瑚疾病的防治提供一定的原材料，推动群体淬灭活性菌在珊瑚疾病防治中的研究，并给予生物被膜污染治理提供较新的研究路径和理论支持。

在后续研究中，应对以上20株活性菌株进行大量发酵，分离活性物质，探究其抑制紫色杆菌QS效应的有效成分及抑制机制；优化菌株的培养基配方及外界培养环境，将具备较高群体淬灭活性的菌株进行大批量发酵；提取纯化其活性物质，分析其化合物结构，并于珊瑚实验缸中进行初步抑制珊瑚白化的实验验证。相关成果可为国内珊瑚礁生态修复工作提供支持，为研发新药物抑制群体感应型细菌感染提供有力依据。

4 结论

本研究选用蔗糖密度梯度离心法稀释珊瑚提取物，模拟珊瑚原生内环境配制原位模拟培养基，在三亚鹿回头半岛三亚湾珊瑚礁的7类珊瑚中分离出256株珊瑚共生菌。根据紫色杆菌严格受QS调控产紫色菌素的特性，利用紫色杆菌CV作模式菌，对珊瑚共生菌进行多次筛选培养，得到20株具群体淬灭活性的菌株。经16S rDNA测序鉴定，群体淬灭活性菌株大部分为弧菌属。结合比浊法以及半固体培养基法，分析群体淬灭活性菌株对两种珊瑚病原菌溶珊瑚弧菌V545和溶藻弧菌Z-14生长、运动的影响，结果显示，5株菌株对溶珊瑚弧菌V545的生长、运动有抑制作用，10株菌株对溶藻弧菌Z-14的生长、运动有抑制作用。扩展研究表明，9株菌株对溶珊瑚弧菌V545生物被膜形成具有抑制作用，14株菌株对溶藻弧菌Z-14生物被膜形成具有抑制作用。上述结果证实珊瑚共附生的群体淬灭活性菌对弧菌的生长、运动及生物被膜形成具有抑制作用。

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