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珊瑚来源群体淬灭活性产生菌的筛选与抑菌活性(4)
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摘要：图2 群体淬灭活性筛选平板Fig.2 Screening plate of quorum quenching activity 2.2 16S rDNA序列检测结果 对筛选得到的20株群体淬灭活性菌株进行16S rDNA测序鉴定及BLAST同源
图2 群体淬灭活性筛选平板Fig.2 Screening plate of quorum quenching activity
2.2 16S rDNA序列检测结果
对筛选得到的20株群体淬灭活性菌株进行16S rDNA测序鉴定及BLAST同源性比对，编号依次为GXU-HJ-1—20。测序结果显示(表1)：GXU-HJ-1、GXU-HJ-2、GXU-HJ-3、GXU-HJ-4、GXU-HJ-7以及GXU-HJ-13—20等13个菌株属于Vibrio属；GXU-HJ-5、GXU-HJ-6、GXU-HJ-8、GXU-HJ-10、GXU-HJ-11等5个菌株属于Ralstonia属；GXU-HJ-9属于Bacillus属，GXU-HJ-12属于Sphingomonas属。
2.3 群体淬灭活性物质对病原菌V545和Z-14生长的影响
菌株GXU-HJ-5、GXU-HJ-8、GXU-HJ-10、GXU-HJ-12、GXU-HJ-18因浓度过低，无法获得有效的生长曲线，进而无法研究其对致病菌的运动情况及对生物被膜生长的影响，故不列入后续研究项目。通过生长曲线来判断菌株是否有抑制作用，并对有抑制作用的菌株平稳期OD600与空白对照平稳期OD600进行统计分析，使用方差检验(P值)，检验抑制作用是否具有显著差异。结果显示(图3，4)：GXU-HJ-1、GXU-HJ-3、GXU-HJ-7、GXU-HJ-15对溶珊瑚弧菌V545有抑制作用；其中，GXU-HJ-15抑制作用较轻微，平稳期较空白对照浓度降低了0.53×107cfu/mL；GXU-HJ-1、GXU-HJ-3、GXU-HJ-7抑制作用较明显，平稳期较空白对照浓度分别降低了0.87×107，0.82×107，2.00×107cfu/mL (P<0.05)。GXU-HJ-4、GXU-HJ-7、GXU-HJ-9、GXU-HJ-19对溶藻弧菌Z-14有抑制作用。其中GXU-HJ-19抑制作用较轻微，平稳期较空白对照浓度降低了0.73×107cfu/mL，GXU-HJ-4、GXU-HJ-7、 GXU-HJ-9抑制作用较明显，平稳期较空白对照浓度分别降低了1.63×107，1.83×107，1.39×107cfu/mL (P<0.05)。
表1 群体淬灭菌株Table 1 Quorum quenching strains编号No.相似菌株Similar strains同源相似性Homology similarity (%)GXUHJ1Vibrio alginolyticus strain ATCC . strain . strain ATCC .08GXUHJ5Ralstonia pickettii strain strain echinoidesstrain DSM . strain strain NBRC .27GXUHJ15 strain . strain NBRC .42GXUHJ17 strain . strain ATCC .06GXUHJ19Vibrio strain NBRC .77
图3 群体淬灭活性菌株发酵液对V545生长的影响(P<0.05)Fig.3 Effect of quorum quenching active strain fermentation broth on the growth of V545 (P<0.05)
2.4 病原菌V545和Z-14的运动情况
图5显示，GXU-HJ-6对溶珊瑚弧菌V545运动性有轻微抑制作用，其运动范围直径较空白对照缩减0.2 mm。图6显示，GXU-HJ-1、GXU-HJ-6、GXU-HJ-7、GXU-HJ-14、GXU-HJ-15、GXU-HJ-16、GXU-HJ-19、GXU-HJ-20对溶藻弧菌Z-14有抑制作用；其中GXU-HJ-1、GXU-HJ-6、GXU-HJ-14、GXU-HJ-19抑制作用较轻微，运动范围直径较空白对照分别缩减0.3，0.3，0.2，0.3 mm；GXU-HJ-7、GXU-HJ-15、GXU-HJ-16、GXU-HJ-20抑制作用较明显，运动范围直径较空白对照分别缩减3.0，0.7，0.5，0.5 mm。
图4 群体淬灭活性菌株发酵液对Z-14生长的影响(P<0.05)Fig.4 Effect of quorum quenching active strain fermentation broth on the growth of Z-14 (P<0.05)
图5 群体淬灭活性菌株发酵液对V545运动性的影响Fig.5 Effect of quorum quenching active strain fermentation broth on the mobility of V545
图6 群体淬灭活性菌株发酵液对Z-14运动性的影响Fig.6 Effect of quorum quenching active strain fermentation broth on the mobility of Z-14
2.5 病原菌V545和Z-14生物被膜生长情况
如图7所示，9株菌株对病原菌V545生物被膜形成具有抑制作用，在溶珊瑚弧菌V545生物被膜形成阶段，相同培养条件下，加入GXU-HJ-2、GXU-HJ-3、GXU-HJ-6、GXU-HJ-7、GXU-HJ-11、GXU-HJ-16、GXU-HJ-17、GXU-HJ-19、GXU-HJ-20的提取物后，其形成的生物膜吸光值均低于空白组，抑制率分别为(67.)%、(84.)%、(73.)%、(30.)%、(82.)%、(72.)%、(56.)%、(20.)%、(81.)%(图7a)。14株菌株对溶藻弧菌Z-14生物被膜形成具有抑制作用，在相同培养条件下，GXU-HJ-1、GXU-HJ-2、GXU-HJ-3、GXU-HJ-4、GXU-HJ-6、GXU-HJ-7、GXU-HJ-9、GXU-HJ-11、GXU-HJ-13、GXU-HJ-14、GXU-HJ-15、GXU-HJ-16、GXU-HJ-17、GXU-HJ-19对病原菌Z-14生物被膜生长的抑制率分别为(93.)%、(93.)%、(94.)%、(95.)%、(79.)%、(94.)%、(91.)%、(51.)%、(91.)%、(93.)%、(88.)%、(89.)%、(95.)%、(14.)%(图7b)，有11个菌株抑制率超过85%。GXU-HJ-2、GXU-HJ-3、GXU-HJ-6、GXU-HJ-11、GXU-HJ-16、GXU-HJ-17等6个菌株对两种病原菌的生物被膜形成均具有较强的抑制作用。
图7 群体淬灭活性菌株发酵液对病原菌生物被膜生长的影响Fig.7 Effect of quorum quenching active strain fermentation broth on the biofilm growth of pathogenic bacteria
3 讨论
本研究在珊瑚共附生微生物中成功筛选出具有群体淬灭活性，且能抑制珊瑚病原菌V545和Z-14生长、运动及生物膜形成的菌株，说明三亚鹿回头半岛三亚湾的珊瑚中具备大量未开发的群体淬灭活性菌种资源。受限于培养条件，本研究中部分菌种难以扩大培养，优化培养基后或有机会发掘更多群体淬灭活性菌株资源，进而在一定程度上改善珊瑚疾病防治现状。
文章来源：《运动精品》 网址: http://www.ydjpzz.cn/qikandaodu/2021/0523/1790.html